Description et principe du ID Screen® Brucellosis Milk Indirect

Ce kit de diagnostic est destiné à la mise en évidence d’anticorps dirigés contre Brucella abortus et melitensis.

Il peut être utilisé sur lait d’ovins, bovins et caprins (laits individuels ou mélange jusqu’à 250 échantillons) en incubation courte ou de nuit.

Les cupules sont sensibilisées avec du LPS de Brucella abortus.

Les échantillons à tester et les contrôles sont distribués purs dans les cupules. Les anticorps antiBrucella, s’ils sont présents, forment un complexe antigène-anticorps.

Un conjugué anti-ruminant marqué à la peroxydase (Po) est distribué dans les cupules. Il se fixe aux anticorps anti-Brucella, formant un complexe antigèneanticorps-conjugué-Po.

Après élimination du conjugué en excès par lavage, la réaction est révélée par une Solution de Révélation (TMB).

La coloration qui en résulte est liée à la quantité d’anticorps spécifiques présents dans l’échantillon à tester :

- en présence d’anticorps dans l’échantillon, il apparaît une coloration bleue qui devient jaune après blocage

- en l’absence d’anticorps dans l’échantillon, il n’apparaît pas de coloration

La lecture est réalisée à une longueur d’onde de 450nm

Composants du kit

Réactifs

Microplaques sensibilisées avec du LPS de Brucella (12x8)

Conjugué concentré (10X)

Contrôle Positif

Contrôle Négatif

Tampon de dilution 3

Solution de lavage concentrée (20X)

Solution de révélation (TMB)

Solution d’arrêt (0,5 M) 

*La composition du kit est indiquée sur l'étiquette de dessus de kit

1. Le conjugué, les contrôles, et la solution de révélation doivent être stockés à 5°C (± 3°C)

2. Les autres réactifs (dont les plaques) peuvent être stockés entre +2°C et +26°C.

Matériel nécessaire mais non fourni

1. Pipettes de précision mono ou multi -canaux capables de délivrer des volumes de 10 µl, 100 µl, 200 µl. 

2. Embouts de pipette à usage unique.

3. Lecteur de microplaques à 96 puits

4. Eau distillée ou désionisée.

5. Système de lavage manuel ou automatique.

6. Plaque de pré-dilution format 96 puits.

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Remarques et précautions d’emploi

1. Ne pas pipeter à la bouche.

2. La solution de révélation peut être irritante pour la peau.

3. La solution d’arrêt (0,5M) peut être nocive en cas d’ingestion et peut entraîner une sensibilisation par contact avec la peau (R22-43). Eviter le contact avec la peau (S24-37).

4. Ne pas exposer la solution de révélation à une lumière vive ni à des agents oxydants.

5. Il est conseillé de décontaminer l’ensemble des éléments à usage unique utilisés au cours des essais par immersion pendant 1 heure minimum dans l’hypochlorite de sodium à 5% fraîchement préparé, avant de les éliminer ou d’autoclaver à 120°C.

Préparation de la Solution de lavage

Si nécessaire, ramener la Solution de lavage concentrée (20X) à température ambiante (21°C ± 5°C) et bien agiter pour assurer la dissolution des cristaux.

Préparer la Solution de lavage (1X) par dilution au 1/20ème de la Solution de lavage (20X) dans de l’eau distillée/désionisée.